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—— 中国食品杂志社
为提高褐藻胶裂解酶活力，采用易错聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术对海洋细菌Tamlana sp. S12中具有代表性的酶组分Alg-2进行体外定向进化。经过2?轮易错PCR及96?孔板发酵筛选，分别获得2?株正突变和2?株负突变菌株，其酶比活力分别是亲本（2?675.2?U/g）的162%、241%、53%、11%。酶的动力学分析显示，正突变株P2-81的Km值比亲本降低50%，而负突变株N2-47的Km值比亲本提高106%，表明突变株对底物的亲和力有极大的上升和下降。基因测序及氨基酸序列分析结果表明，Glu、Thr、Ser、Asp和Tyr对褐藻胶裂解酶活力提高起到正面的积极作用，而Lys的突变起到负面的消极作用，后续人工合成的定点突变则进一步证实Asp和Lys的正/负作用。本研究有助于深入理解褐藻胶裂解酶的催化机制，为后续利用理性设计手段改造褐藻胶裂解酶提供理论参考。
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