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—— 中国食品杂志社
为提升枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）020的肌苷产量并提供遗传改造参考,该研究采用常压室温等离子体（ARTP）诱变,全基因组重测序与基因过表达3种技术相结合的策略,利用ARTP技术对原始菌株020进行诱变,经高通量筛选获得一批正突变株,并通过重测序鉴定关键突变基因。结果表明,通过ARTP诱变处理获得2 732个突变菌株,成功筛选出了158个肌苷产量显著增加的正突变菌株,其中突变菌株S195发酵72 h后肌苷产量最高7.24 g/L,较原始菌株020提高3.11倍。突变菌株S195全基因组重测序及突变位点分析结果显示,基因deoB、glcP和prsA分别参与磷酸核糖代谢、葡萄糖转运和磷酸核糖焦磷酸（PRPP）合成,其中prsA基因编码的磷酸核糖焦磷酸激酶在肌苷合成途径中发挥着核心调控作用。在此基础上,以质粒pHT43为载体在突变菌株S195中过表达prsA基因,构建重组菌株S1951,该菌株肌苷产量进一步提高至11.15 g/L,是原始菌株020的4.79倍。结果证实ARTP诱变与关键基因prsA过表达相结合可显著强化枯草芽孢杆菌的肌苷生物合成,为理性构建高产菌株提供可靠策略与理论支撑。
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