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—— 中国食品杂志社
为构建一种非甲醇诱导的甲壳素脱乙酰酶毕赤酵母（Pichia pastoris）表达载体和工程菌,该研究扩增克隆酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的2个甲壳素脱乙酰酶基因ScCDA1和ScCDA2,对其进行生物信息学分析,采用同源重组技术分别将ScCDA1和ScCDA2基因克隆在含有组成型强启动子pGAP的载体pGAPK上,在毕赤酵母GS115中发酵表达,研究其脱乙酰基酶活性。采用碱量法测定脱乙酰度,研究重组菌株对底物甲壳素的脱乙酰基能力。结果表明,ScCDA1和ScCDA2基因全长分别为906 bp和939 bp,无内含子,其编码蛋白分子质量分别为34.64 kDa和35.69 kDa,两个蛋白均不含有跨膜区和信号肽,同源性为51%。成功构建高拷贝重组菌株pGAPK-ScCDA1/GS115和pGAPK-ScCDA2/GS115,摇瓶发酵72 h时,其脱乙酰基酶活性达到最高,分别为18.69 U/mL和18.14 U/mL,对甲壳素的脱乙酰度分别为59.20%和53.55%,极显著高于对照组的3.58%（P<0.01）。
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