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瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶基因的克隆与表达
来源:食品科学网 阅读量: 117 发表时间: 2017-06-07
作者: 刘晓华,李慧美,柯颖笑,张凯强,李响敏,李 欣,付金衡,李海星
关键词: 共轭亚油酸|亚油酸异构酶|干酪乳杆菌|克隆|表达
摘要:

以从黄牛瘤胃中分离到的一株具有将亚油酸转化为c9,t11-共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Fx为出发菌株,提取其基因组DNA,聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)扩增得到1 700 bp大小的亚油酸异构酶(linoleic acid isomerase,LAI)基因片段,将该基因片段纯化后进行TA克隆,得到重组质粒pUCm-T-LAI,将重组质粒pUCm-T-LAI和表达质粒pET-DsbA同时进行双酶切,连接得到重组表达载体pET-DsbA-LAI,经PCR鉴定和酶切后,将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21中,得到具有LAI活性的重组菌株,能将亚油酸转化为c9,t11-CLA,表明从Lactobacillus casei Fx成功克隆LAI,该研究将有助于深入了解不同瘤胃细菌特异性合成不同CLA异构体的LAI基因差异。

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