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—— 中国食品杂志社
目的：克隆小麦蛋白质二硫键异构酶（wheat protein disulfide isomerase，wPDI）基因，实现其在大肠杆菌中的表达并探究其酶学性质。方法：以小麦种子总RNA为模板，逆转录并扩增得到wpdi，并以pET-30b为表达载体、大肠杆菌BL21（DE3）为宿主菌进行原核表达，表达产物经金属螯合层析纯化后进行了酶学性质研究。结果：克隆的基因全长1 548 bp，与“Wyuna”品种小麦wpdi基因相似性达99%。构建了pET-30b-wpdi表达载体，获得wPDI的最佳表达条件为：诱导温度22 ℃，诱导时间6 h，诱导剂浓度0.5 mmol/L。该酶含4 个硫氧还蛋白结构域，分子质量约为66.2 kD，具有二硫键的还原酶和异构酶活性以及分子伴侣活性。结论：对重组wPDI的表达和酶学性质研究，为wPDI在面制品加工及其他方面的应用提供参考依据。
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