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—— 中国食品杂志社
目的：建立简便、灵敏检测金黄色葡萄球菌肠毒素I（staphylococcal enterotoxin I，SEI）的双抗夹心酶联免疫吸附方法（double-antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay，DAS-ELISA）。方法：利用DAS-ELISA检测程序确定单克隆抗体、抗血清、辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的羊抗兔IgG（IgG/HRP）的最佳稀释度，再通过检测不同包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、IgG/HRP作用时间以及四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine，TMB）显色时间条件下的OD450 nm值对实验条件进行优化，最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标回收率指标对方法进行评价。结果：抗SEI单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为2.89 mg/L，抗SEI兔血清稀释度1∶2 000，酶标二抗稀释度1∶6 000；1×磷酸缓冲盐溶液（pH 7.4）为最佳包被缓冲液；最佳封闭时间、抗原孵育时间、酶标二抗孵育时间和TMB显色时间分别为60、90、30 min和15 min。该方法的回归方程为y=0.040 9x＋0.042 9，R2=0.993 3；灵敏度为0.5 μg/L，精密度批内变异低于10%，批间变异低于15%，除巴氏杀菌牛乳外，对生理盐水、熟牦牛肉糜、大米饭和超高温瞬时灭菌牛乳回收率达90%以上。结论：本研究建立了一种快速检测SEI的双抗夹心方法。
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