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—— 中国食品杂志社
为了实现该细菌素的外源表达，本实验首先利用聚合酶链式反应从乳酸片球菌PAF中扩增出乳酸片球菌素PA-1的结构和免疫基因，然后克隆到表达载体pGEX-6p-1，构建了N端含有GST-His-DDDDK标签的重组质粒pGEX/his-pedAB，然后转化进入大肠杆菌Rosetta（DE3）感受态细胞，经异丙基硫代半乳糖苷诱导，重组乳酸片球菌素PA-1在大肠杆菌胞内成功表达。表达的融合蛋白先经过镍亲合层析柱纯化，然后注入谷胱甘肽S-转移酶亲和色谱柱用肠激酶处理，释放出成熟的乳酸片球菌素PA-1。利用高效液相色谱和质谱技术检测乳酸片球菌素PA-1纯度。以单核细胞增生李斯特氏菌CMCC54004为指示菌，利用琼脂扩散法检验乳酸片球菌素PA-1活性。结果表明，携带GST-His-DDDDK标签的融合蛋白无活性，标签切除后其抑菌活性恢复，且其纯度达90%以上。
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