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—— 中国食品杂志社
本实验主要对鲢鱼半胱氨酸蛋白酶抑制因子Cystatin进行原核表达和纯化鉴定，并研究重组Cystatin对铜绿假单胞菌的抑菌效果。首先用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside，IPTG）诱导转入pET-30-Cystatin的E.coli BL21（DE3）表达重组Cystatin蛋白，经Ni2+-NTA镍离子亲和层析对其进行纯化，该重组蛋白在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示单一条带，分子质量约20.6 kD，在TSK-GEL G2000SW凝胶过滤高效液相色谱上呈单一活性峰，纯度为94.27%，经标准曲线计算其分子质量为20.9 kD；其次，利用抑制剂滴定曲线法，以偶氮酪蛋白为底物，确定重组Cystatin对木瓜蛋白酶（45.375 μmol）的一个抑制活性单位为0.718 μg；最后通过滤纸片扩散法鉴定鲢鱼重组Cystatin对铜绿假单胞菌的抑菌效果，结果表明Cystatin的添加量为20、60、120、200 U/片时，抑菌圈直径分别为8、9、13、26 mm。鲢鱼重组Cystatin对铜绿假单胞菌的抑菌效果呈剂量依赖关系。
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