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—— 中国食品杂志社
通过对玉米半胱氨酸蛋白酶（cysteine protease from Zea mays，zmCP1）同源模建和底物对接研究发现，W308位点在木瓜蛋白酶家族（C1家族）高度保守，且位于zmCP1催化三联体残基N306位点附近，与绝大多数底物形成π-π键，可参与底物和酶活性中心的结合，是该酶的关键位点；结合Rosetta design程序设计，对W308位点进行突变，获得W308C突变体，并在大肠杆菌BL21中表达。酶学性质表征实验结果表明：突变体W308C的最适温度为55 ℃，最适pH 6.0；在70、80、90 ℃下的半衰期为75.33、57.24、40.29 min，分别是野生型的1.21、1.19、1.01倍；突变体W308C和野生型的特异性常数Kcat/Km分别为11.02、5.92 L/（μmol·min），催化活性提高了0.86倍。
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