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—— 中国食品杂志社
目的：构建天然噬菌体单域重链抗体文库，淘选可应用于食品安全检测的单域重链抗体。方法：以未经免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血为起始材料，提取RNA 反转录为cDNA，根据重链抗体保守序列设计引物，通过半巢式PCR 法扩增获得全套重链抗体可变区编码基因，将其克隆至噬菌粒pHEN1，电转化大肠杆菌TG1 得到初级抗体库，辅助噬菌体KM13 感染后得到噬菌体展示库。采用固相淘选法分别对3 种人工抗原进行淘选。结果：单域重链抗体编码基因得到有效扩增，经10 次电转化获得初级文库，命名为SNAL，实际库容量达到1.6 × 107 个独立克隆，菌落PCR 鉴定结果表明，克隆效率约为87%，辅助噬菌体救援后得到的展示文库命名为SNA-PDL，滴度达1013CFU/mL。对3 种不同人工抗原DON-MBSA、NOR-BSA 和AFB1-OVA 的淘选均有富集现象。结论：构建了天然噬菌体单域重链抗体文库，文库的多样性较好，可以用于后续淘选。
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