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—— 中国食品杂志社
目的：构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法：从分泌抗AMOZ 的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA，经RT-PCR 反转录成cDNA，设计通用简并引物，PCR 扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延伸PCR (SOE-PCR)，将VH 和VL 基因用编码(G1y4Ser)3 的linker随机拼接成单链抗体(scFv)基因，然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E 中，转化大肠杆菌(Escherichia coli) TG1 感受态细胞，经辅助噬菌体M13K07 超感染，建立噬菌体单链抗体库。随机挑取10 个阳性克隆，经PCR 和双酶切鉴定，并测序。登陆DNAMAN 软件对序列进行分析、比对。结果：成功扩增VH、VL 及scFv 基因，并得到库容为1.2 × 106 的噬菌体抗体库，噬菌体的滴度为2.0 × 1010PFU，PCR 鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高，软件对序列比对结果显示，scFv 基因全长序列之间差异为8.38%，VH 序列差异为3.68%，VL 序列差异为14.34%，且序列差异多集中在CDR 抗原结合区域对应的核酸序列上。结论：已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库，为进一步富集筛选并表达抗AMOZ 的衍生物的单链抗体提供参考。
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