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密苏里游动放线菌葡萄糖异构酶基因xylA的克隆及其表达条件的优化
来源:食品科学网 阅读量: 121 发表时间: 2017-06-07
作者: 王贺,杨瑞金,华 霄,钱婷婷,张文斌,蒋孝燕
关键词: 密苏里游动放线菌|葡萄糖异构酶|表达|Slowdown PCR
摘要:

为克隆、表达密苏里游动放线菌葡萄糖异构酶(GI)基因xylA,并对其诱导表达条件进行初步优化。采用Slowdown PCR方法克隆得到密苏里游动放线菌(Actinoplanes missouriensis)CICIM B0118(A)的葡萄糖异构酶基因xylA,构建pET-28a(+)-xylA 表达载体,并转化至E. coli BL21 (DE3),经异丙基-β -D- 硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对其表达产物进行SDS-PAGE 电泳。结果表明,融合蛋白分子质量约为45kD。在诱导时间9h、0.6mmol/L IPTG、30℃和OD600nm 值为0.8 的最适培养条件下,酶比活力最高达到62.42U/mL。

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