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芋头多酚氧化酶的分离纯化与酶学特性
来源:食品科学网 阅读量: 107 发表时间: 2021-07-13
作者: 崔晓颖,彭新颜,贺红军,张敏,张晓彤
关键词: 芋头;酶促褐变;多酚氧化酶;分离纯化;酶学特性
摘要:

以鲜芋头为原料,通过提取、30%~80%饱和度硫酸铵沉淀、透析、超滤,以及柱层析等步骤对芋头多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)进行逐级分离纯化,并探讨其酶学特性及抑制剂对其作用规律。结果表明:经DEAE-Sepharose、Superdex G-75色谱柱纯化后,得到了电泳纯PPO,比活力为27 471.26 U/mg,纯化倍数达6.37 倍。纯化后的PPO经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,其分子质量约为24 kDa。PPO与底物结合能力顺序为:邻苯二酚>间苯二酚>间苯三酚>焦性没食子酸>L-酪氨酸。PPO的最适反应温度、pH值和反应时间分别为30 ℃、6.8和60 s。抗坏血酸和L-半胱氨酸对提取的PPO有较强的抑制作用,其抑制类型分别属于反竞争性抑制和竞争性抑制方式。结果表明,在芋头加工过程中通过控制温度、pH值或加入适当的抑制剂处理,可以有效减少褐变的发生。

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