建立一种利用高效液相色谱法检测肉制品中腺苷酸、肌苷酸、鸟苷酸、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤的方法,并对其进行方法学考察。结果表明:优化后的方法为样品中加入体积分数为5%的高氯酸溶液,常温振荡器振荡30 min,离心,取上清液,在样品中再加入体积分数5%的高氯酸溶液重复提取1 次,合并2 次提取液,调节提取液pH值为6.5,用水转移定容至50 mL。取少量提取液,加入正己烷液液萃取除杂,离心,取下层溶液。采用液相色谱仪进行分析,使用C18柱,流动相为0.01 mol/L磷酸二氢钾-甲醇溶液(98∶2,V/V),流速1.0 mL/min,等度洗脱;检测波长254 nm,进样量20 μL,外标法定量。经方法学考察,5 种核苷酸在0.5~80 μg/mL内线性关系良好,决定系数均大于0.999,检出限为5.0 mg/kg,定量限为15.0 mg/kg,加标回收率为80.1%~109.5%,相对标准偏差≤9.6%(n=3)。综上所述该方法具有操作简便、定量准确、重复性好等特点,利于广泛推广,可以应用于复杂基质的肉制品中5 种游离核苷酸的检测。
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