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—— 中国食品杂志社
通过优化毕赤酵母Komagataella phaffii GS115表达系统，显著提升高倍甜味蛋白Brazzein的分泌表达水平。首先成功获得重组菌株K. phaffii Bra-1，经摇瓶发酵优化，在甲醇诱导体积分数2%、生物素体积分数0.08%、温度30 ℃、初始pH 6.0的条件下，表达量达到90.2 mg/L。进一步表达元件筛选优化实验表明内源醇氧化酶1启动子（PAOX1）具有最优表达性能；αΔ57-70信号肽（SαΔ57-70）通过增强信号肽柔性使Brazzein表达量达到183.2 mg/L；共表达调控元件蛋白二硫键异构酶进一步将产量提高至209.3 mg/L。在5 L生物反应器中，调控诱导起始OD600为100、pH值恒定在5.0，通过分批补料策略使得Brazzein产量达到1.4 g/L。本研究为甜味蛋白Brazzein的规模化生产与应用奠定了基础。
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