
为探究湖北某奶牛场犊牛腹泻病因,从奶牛场采集粪便、肛拭子和牛奶样品,通过病原筛查和分离鉴定,进一步采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定、多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST)分析等方法对分离菌株进行分子分型鉴定,并进行致病性和耐药性分析。结果表明,16 份肛拭子、21 份粪便和12 份牛奶样本中分离出4 株优势菌株,经16S rRNA和PCR鉴定后,其中3 株菌为同一株大肠杆菌O157(Escherichia coli O157),命名为JZ-0720;MLST分析确定分离菌株为ST10型;血清学和PCR鉴定确定分离菌株为E. coli O157:H12型。分离菌株JZ-0720携带XJrfbE、uspA和stx1 3 种毒力基因,对Vero细胞能产生类似E. coli O157:H7的毒素效果;小鼠感染分离菌株JZ-0720后多个器官出现不同程度的病变,低剂量感染则导致小鼠腹泻,高剂量感染可致小鼠死亡,其半数致死剂量为5.36×108 CFU/mL;分离菌株JZ-0720携带gyrA、bla-CTX、bla-TEM、bla-NDM和aadA1 5 种耐药基因,对新霉素、红霉素等药物耐药;双协同药敏实验显示,分离菌株产金属β-内酰胺酶(metallo-β-lactamases,MBLs)而不产超广谱β-内酰胺酶;中药乌梅、艾叶对JZ-0720有很好的抑菌效果。综上,本研究分离得到1 株血清型为E. coli O157:H12型的奶牛源致病性大肠杆菌且MLST分型为ST10型,携带多种毒力基因和耐药基因,进行人工感染可致小鼠腹泻,对中药乌梅、艾叶以及多种抗生素敏感。研究结果可为E. coli O157非H7型大肠杆菌的防治研究提供参考依据。
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