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—— 中国食品杂志社
T4 DNA聚合酶（T4 DNA polymerase，T4 DP）是基因工程等相关领域中不可缺少的工具酶。为获得大量高纯度并具有生物活性的可溶性T4 DP，通过从T4噬菌体基因组中克隆出T4 dp基因，将其克隆到pET-22b（＋）质粒中构建重组表达载体pET-22b（＋）-T4 dp，经DNA测序检测成功后，转化到大肠杆菌Transetta（DE3）中进行自诱导表达，通过磁珠法高效准确检测T4?DP的可溶性表达情况，并对自诱导的温度和时间进行优化，确定最佳诱导条件为30?℃诱导培养10?h，分别利用超声波法、超声波-溶菌酶法及化学裂解法对自诱导表达的重组菌体进行破碎，确定最佳破碎方法为化学裂解法，分别利用Ni SepharoseTM 6 Fast Flow亲和层析柱和MagNi磁珠纯化重组菌体裂解后上清液中的T4 DP，MagNi磁珠能高效地纯化出高纯度的T4 DP，其质量浓度为3 073.960 μg/mL，成功获得了高纯度高质量浓度的可溶性T4 DP，并使其成功应用于克隆载体的构建，证明其具有较好的末端平滑化活性。
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