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—— 中国食品杂志社
以鲜切荸荠为材料，通过pH 7.5 Tris-HCl缓冲液浸提得到类黄酮3’-羟化酶（flavonoid 3′-hydroxylase，F3’H）粗酶液，然后采用硫酸铵分级沉淀、透析、二乙氨乙基（dicthylaminoethyl，DEAE）-纤维素离子交换层析及Sephadex G-100凝胶过滤层析进行分离纯化，最终所得纯化酶的纯化倍数达到14.01，比活力提高到478.49 U/mg，回收率为6.38%。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamidegel electrophoresis，SDS-PAGE）进行纯度鉴定，已达到电泳纯，测定得到其分子质量约为53.09 kD。纯化酶F3′H的最适温度为30 ℃，最适pH值为7.5；以柚皮素作为底物，测得该酶的米氏常数（Km）为1.08 mmol/L，最大反应速率（vmax）为416.67 U/（min·mL）；对于酶活性，高浓度的Na＋表现出微弱的抑制作用，Ca2＋和柠檬酸具有强烈的抑制作用，而Fe2＋、Mg2＋、NADPH和VC却表现出强烈的激活作用。
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