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—— 中国食品杂志社
针对大肠埃希氏菌O157∶H7 rfbE和Flic靶基因保守序列，设计特异性引物和探针，优化反应体系，并加入内参（internal amplification control，IAC），建立能够实时监控反应过程的荧光定量聚合酶链式反应（polymeasechain reaction，PCR）检测方法。结果表明，该方法对E. coli O157∶H7基因组DNA的最低检测限为1 pg/μL；对含有靶基因质粒的最低检测限为103 copies/μL；对细菌的最低检测限为5×103 CFM/mL；Ct值与模板拷贝数均呈良好的线性关系（R2=0.999）。人工污染实验结果表明，在初始菌量为7 CFM/25 g时，采用水洗加试剂盒法提取DNA，E. coli O157∶H7在增菌6 h后即可检出；而采用水煮法提取DNA，则在增菌10 h后方可检出。建立的E. coli O157∶H7实时荧光定量PCR方法，既能有效检测食品中O157∶H7，又能实时监测PCR反应过程，有效防止“假阴性”的发生。
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