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—— 中国食品杂志社
为了提高酵母菌的γ-氨基丁酸产量，本研究以十六烷基三甲基溴化铵法（hexadecyl trimethy ammoniumbromide，CTAB）提取的酿酒酵母28基因组DNA为模板，扩增得到序列长度为1 758 bp的GAD1基因，经比对与S. cerevisiae S288c的一致性达到98.58%，并设计引物扩增包括GAD1基因上游启动子及调控序列，下游终止子在内的全长基因序列，长度为3 490 bp。将全长基因序列克隆至高拷贝质粒pUG6，构建重组质粒p28。以菌株28作为出发菌株进行转化，经G418抗性筛选得到转化子，进一步经过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）实验验证，质粒提取及酶切验证，确证得到重组子DL28。经重组质粒p28的特性研究得知，重组质粒p28具有良好的遗传稳定性，无抗性传代培养10 次重组质粒不丢失。转化后进行酶活力测定，重组子DL28的谷氨酸脱羧酶（glutamic acid decarboxylase，GAD）酶活力比菌株28提高73.8%。通过以上实验结果得出结论，GAD基因高表达菌株DL28具有更高的G418抗性和GAD酶活性。
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