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—— 中国食品杂志社
目的：克隆表达鸡蛋主要过敏原Gal d 3 基因并检验其免疫活性。方法：提取鸡蛋的总RNA，采用RTPCR方法扩增出目的基因片段，将其克隆入T 载体中进行测序和分析。设计带有酶切位点的特异性引物，采用RTPCR获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a 中进行诱导表达。通过Ni2+ 亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，采用免疫印迹(Western blotting)方法检测其IgE 结合活性。结果：克隆获得了鸡蛋主要过敏原Gal d 3。基因开放阅读框为2118 个碱基(包括终止密码子)，编码705 个氨基酸。该序列编码的蛋白等电点为6.5，相对分子质量约为76000。表达产物经亲和层析纯化，用Western blotting 方法检测免疫学活性，目的蛋白具有良好的免疫原性。结论：成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原Gal d 3 基因，该蛋白具有良好的免疫原性。
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