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—— 中国食品杂志社
通过共表达分子伴侣二硫键异构酶（protein disulfide isomerase，PDI）和毕赤酵母转录因子Aft1，提高重组人溶菌酶（human lysozyme，HLY）在毕赤酵母中的分泌表达水平。将构建的分子伴侣表达载体pG418-PDI和毕赤酵母转录因子Aft1表达载体pG418-Aft1线性化后，电击转化重组毕赤酵母KM71-HLY细胞，用含G418的平板筛选阳性转化子，得到共表达分子伴侣PDI和HLY，及共表达毕赤酵母转录因子Aft1和HLY的工程菌株KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1。摇瓶发酵分析共表达PDI和Aft1对HLY表达水平的影响。结果表明，工程菌KM71-HLY、KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1经甲醇诱导均产生14.7 kDa HLY，发酵上清液在含溶壁微球菌平板上出现抑菌圈。在诱导表达前期，KM71-HLY-pG418-PDI、KM71-HLY-pG418-Aft1和KM71-HLY生长量无明显差别；70 h后，KM71-HLY-pG418-PDI菌株和KM71-HLY-pG418-Aft1菌株生物量少于KM71-HLY，发酵最终生长量分别为KM71-HLY的92.8%与84.1%。KM71-HLY、KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1经168 h甲醇诱导，胞外分泌总蛋白量分别为324.02、350.87 mg/L和474.8 mg/L，发酵液酶活力分别为34 880、45 600 U/mL和50 180 U/mL。与KM71-HLY相比，KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1发酵产胞外总蛋白分别增加了8.3%和46.5%；KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1所产胞外溶菌酶总酶活力较KM71-HLY分别增加了30.7%和43.9%。
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