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Streptomyces septatus磷脂酶D在毕赤酵母中的重组表达及酶学性质分析
来源:食品科学网 阅读量: 89 发表时间: 2020-04-26
作者: 黄琳,马杰莹,王爽,王楠,MORADANA GAMAGE Rasadi Sajeewa Rajakaruna,路福平,刘逸寒
关键词: 链霉菌;磷脂酶D;毕赤酵母;表达;酶学性质;磷脂酰丝氨酸
摘要:

以Streptomyces septatus TCCC 21057基因组为模板,扩增得到磷脂酶D(phospholipase D,PLD)基因(pld),经合成获得pld密码子优化基因(pldm),以pPIC9K为表达载体,毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115为宿主菌株,构建获得毕赤酵母重组菌株GS115/pPIC9K-pldm,摇瓶发酵后获得的重组PLD(rPLDM)转酯活力达2.37 U/mL;rPLDM经纯化后进行转酯酶学性质分析,其最适作用温度为60 ℃,最适作用pH值为6.5;在单水相反应体系中,40 ℃、pH 6.5、Ca2+浓度10 mmol/L、大豆磷脂酰胆碱和L-丝氨酸物质的量比1∶10、rPLDM添加4.0 U/mL,反应6 h后,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)的产率可达到33%。本研究通过对rPLDM的重组表达、转酯酶学性质及催化合成PS的研究,为进一步实现酶法合成新资源食品PS奠定了基础。

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