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—— 中国食品杂志社
以‘宁杞1号’枸杞果实为材料，利用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）技术，克隆出枸杞木糖异构酶基因（Lycium barbarum Linn. xylose isomerase，LbxylA）的全长，开放阅读框为1 446 bp，编码481 个氨基酸，蛋白质分子质量为53.54 kDa，理论等电点5.37；对其进行生物信息学分析，发现LbxylA与烟草和马铃薯的木糖异构酶基因序列相似性较高，达到95%；构建重组质粒pGEX4T-1-LbxylA，转化到大肠杆菌Rosetta（DE3）中进行原核表达，通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-Dthiogalactoside，IPTG）诱导培养，筛选出重组蛋白的适宜表达条件为：在18 ℃条件下100 μmol/L IPTG诱导10 h蛋白量最大，该蛋白为融合表达的且部分可溶；进一步纯化该蛋白并将获到的LbxylA融合蛋白为抗原，以日本大耳兔免疫制备LbxylA多克隆抗体，采用间接酶联免疫吸附测定法，测定抗体血清的效价高于1∶81 000；随着果实的发育，果实中LbxylA的相对表达量呈现逐渐下降的趋势，且在开花后9 d果实中LbxylA表达丰度最高；利用Western blot检测到LbxylA蛋白的变化与LbxylA相对表达量基本一致，但在开花后9 d果实中蛋白表达量低于开花后15 d，随后逐渐降低，果实成熟时两者的表达量到达最低。这表明枸杞果实发育前期LbxylA蛋白由于翻译后加工可能导致蛋白质表达滞后于基因，其结果有助于进一步研究LbxylA功能及其对果实糖积累的作用。
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