
从米糠蛋白抗氧化肽混合物中分离鉴定获得新的抗氧化活性单肽,并揭示其潜在抗氧化机制。以课题组前期制备的米糠蛋白抗氧化肽混合物为研究对象,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼、2,2’-联氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力为靶向跟踪指标,顺次采用超滤、凝胶色谱、离子交换色谱、反相-高效液相色谱技术手段分离纯化。采用液相色谱-串联质谱联用技术鉴定活性组分中的多肽序列。通过计算机辅助筛选结合分子对接技术揭示鉴定肽的潜在抗氧化机制。结果表明,从反相高效液相色谱分离后获得的高抗氧化活性组分R-2中鉴定出183 条肽段,最终筛选出5 条具有抗氧化潜力的米糠蛋白活性肽,分别为WCY、YFC、HWC、AHWC、QGYY。其中WCY、YFC、HWC、AHWC表现出良好的体外抗氧化活性。分子对接结果表明这4 条肽段与Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keap1)的结合能均低于-7 kcal/mol,其相互作用力主要为氢键和疏水相互作用,表明其可通过抑制Keap1/核因子E2相关因子2信号通路起到抗氧化作用。综上,本研究筛选出的米糠蛋白抗氧化肽具有作为天然抗氧化剂的潜力,可在为米糠蛋白活性肽在食品与医药领域的开发应用提供理论基础。
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