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—— 中国食品杂志社
为实现从L-谷氨酸到α-酮戊二酸（α-ketoglutaric acid，α-KG）的高效生物转化，将来源于白丝北里孢菌（Kitasatospora setae KM-6054）的L-谷氨酸氧化酶（L-glutamate oxidase，LGOX）在大肠杆菌（Escherichia coli）中实现异源表达，并研究其酶学特性。根据LGOX的氨基酸序列和大肠杆菌系统偏好性合成LGOX全基因序列，并通过pET28a（＋）/DE3系统在大肠杆菌中实现了功能表达。诱导剂异丙基硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG）终浓度为0.1 mmol/L，20 ℃诱导18 h，重组大肠杆菌粗酶液酶活力可达49.10 U/mL。亲和层析获得酶比活力为45.98 U/mg纯酶，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳条带显示蛋白分子质量大小约为70 kDa。酶学性质研究表明：其最适反应温度和pH值分别为40 ℃和6.0；Km值为1.23 mmol/L，Vmax值为76.24 μmol/（min·mg），L-谷氨酸为该酶的最适底物。本研究确定了LGOX在E. coli BL21中的异源表达及酶学特性，为生物转化合成α-KG提供了新的参考途径。
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