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纳豆激酶基因工程菌的构建及酶活力分析
来源:食品科学网 阅读量: 106 发表时间: 2017-07-24
作者: 崔 青,钱炳俊,姚晓敏,季顺利,鲁飞凤,吴 静,张建华
关键词: 纳豆激酶;aprN基因;枯草芽孢杆菌;基因工程菌;酶活力
摘要:

纳豆激酶由纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)的aprN基因编码,在体内外具有很强的溶解纤维蛋白活性。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增B. subtilis natto的aprN基因,并依据B. subtilis的密码子偏好性优化了起始30 个氨基酸的密码子,构建了重组表达质粒pHT01-aprN。经限制性酶酶切、PCR扩增和测序验证了其编码的正确性。通过电击法将含有强启动子的pHT01-aprN导入B. subtilis,利用氯霉素抗性筛选获得B.s 168/pHT01-aprN工程菌。经IPTG诱导表达,摇瓶发酵培养最高酶活力为(289.00±3.42) U/mL,是野生菌的3.9 倍,酶活力表达稳定性良好。

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