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—— 中国食品杂志社
采用重叠延伸的方法成功将抗孔雀石绿（malachite green，MG）单克隆细胞的轻链VL和重链VH用连接肽(Gly4Ser)3连接，形成单链抗体（single chain variable fragment，scFv）基因，并将其酶切连接进入含有碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，PhoA）基因的载体plip6/GN中，成功构建重组质粒plip6/GN-MG-scFv。随后重组质粒转入大肠杆菌BL21，经诱导表达后，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting鉴定结果表明所获得的融合蛋白scFv-PhoA大小约72 kD。利用scFv与MG特异性结合的活性和PhoA催化对硝基苯磷酸二钠的显色机制，经过直接竞争酶联免疫吸附法测定融合蛋白scFv-PhoA的IC50为9.81 ng/mL。本方法操作简单、灵敏度高且检测时间短，这为进一步进行MG免疫法快速检测提供了参考。
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