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肠出血性大肠杆菌O157∶H7变种Q蛋白对志贺毒素表达的影响
来源:食品科学网 阅读量: 92 发表时间: 2017-06-07
作者: 李嘉文,郑冬冬,王宏勋,刘志国,余晓丽,周帼萍,李 睿
关键词: 大肠杆菌O157∶H7;Q蛋白;反转录荧光定量PCR;志贺毒素;hiTAIL-PCR
摘要:

1株肠出血性大肠杆菌O157∶H7变种EC169菌株,携带stx基因但不表达志贺毒素。通过高效热不对称交错聚合酶链式反应(high-efficiency thermal asymmetric interlaced polymerase chain reaction,hiTAIL-PCR)hiTAILPCR扩增得到EC169 stx1及其上游核苷酸片段并克隆测序,结果表明:EC169 q基因与标准株sakai q基因相比存在6个SNP位点。通过PCR扩增O157∶H7高毒株EC150 q基因全长,并构建表达载体pkk223-q分别转化EC169和低毒株EC157。反转录荧光定量PCR实验结果表明,外源q基因在EC169和EC157重组菌中可高效表达,并引起EC157stx转录水平上调,但EC169重组菌stx转录水平不变。反向乳胶凝集实验结果亦证实EC157重组菌志贺毒素表达量提高,而EC169重组菌志贺毒素表达量不变。Q蛋白变异可能并非EC169志贺毒素不表达的主要原因。

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