领学术科研之先，创食品科技之新
—— 中国食品杂志社
通过将乙醛脱氢酶2（acetaldehyde dehydrogenase 2，ALDH2）与NusA-tag融合表达，以获得能够在大肠杆菌中可溶性表达并且具有较好活性的重组蛋白。首先，根据Aldh2的基因序列设计引物，引入EcoRI和XhoI的酶切位点，聚合酶链式反应扩增出Aldh2基因片段，连接到pMD19-T-simple载体，并转化到大肠杆菌DH5α菌株。测序正确后，双酶切处理，将Aldh2基因片段克隆到表达载体pET44b（＋）上NusA-tag下游的EcoRI和XhoI酶切位点之间，得到pET44b（＋）-NusA-Aldh2重组载体，转化入大肠杆菌BL21（DE3）菌株。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside，IPTG）诱导，表达的融合蛋白具有良好的溶解性，主要存在于上清液中。融合蛋白的最优表达条件为IPTG浓度0.25 mmol/L、诱导温度37 ℃、诱导时间3 h。重组蛋白的最适反应温度为37 ℃，在pH 7.0时达到最好的催化效果。不同金属离子如Ca2＋、K＋、Na＋、Mg2＋、Mn2＋都对酶有激活作用，且Mg2＋效果最好，最佳的酶活性为1.64 U/mL。而野生型ALDH2在大肠杆菌中表达时完全以无活性的包涵体形式存在，复性后得到的酶活性为1.43 U/mL。本研究通过引入NusA进行融合表达，实现了ALDH2在大肠杆菌中的可溶性表达，且重组蛋白的活性优于包涵体复性蛋白。这些结果表明利用NusA进行融合表达是制备重组ALDH2的一个良好方法。
2023年第44卷 2022年第43卷 2021年第42卷 2020年第41卷 2019年第40卷 2018年第39卷 2017年第38卷 2016年第37卷 2015年第36卷 2014年第35卷 2013年第34卷 2012年第33卷 2011年第32卷 2010年第31卷 2009年第30卷 2008年第29卷 2007年第28卷 2006年第27卷 2005年第26卷 2004年第25卷 2003年第24卷 2002年第23卷 2001年第22卷 2000年第21卷 1999年第20卷 1998年第19卷 1997年第18卷 1996年第17卷 1995年第16卷 1994年第15卷 1993年第14卷 1992年第13卷 1991年第12卷 1990年第11卷 1989年第10卷 1988年第09卷 1987年第08卷 1986年第07卷 1985年第06卷 1984年第05卷 1983年第04卷 1982年第03卷 1981年第02卷 1980年第01卷
电话: 010-87293157
地址: 北京市丰台区洋桥70号
版权所有 @ 2023 中国食品杂志社 京公网安备11010602060050号 京ICP备14033398号-2
