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枯草芽孢杆菌角蛋白酶kerC基因在毕赤酵母中的高效表达
来源：食品科学网 阅读量: 94 发表时间: 2017-06-07
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作者: 韩学易，唐自钟，王丽华，陈 惠
关键词: 枯草芽孢杆菌；角蛋白酶；kerC基因；毕赤酵母；高效表达
摘要:

以角蛋白酶基因为研究对象，构建毕赤酵母(Pichia pastoris)稳定的高效表达系统。采用PCR方法从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-3中克隆得到角蛋白酶基因kerC，将其构建在毕赤酵母表达载体pPICZαA上，得到重组质粒pPICZαA-kerC，转入毕赤酵母X-33中，成功实现了角蛋白酶基因kerC在真核表达系统中的高效表达。重组菌株以体积分数1%的甲醇诱导培养108h后，酶活力可达32.31U/mL，提高了11.15倍。重组酶最适温度为60℃，最适pH值为7.5，反应体系中3mmol/L的Co2+、Fe2+和Ca2+能明显增强其酶活力。SDS-PAGE检测表明，重组酶分子质量约为31kD。

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