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Ⅵ型类人胶原蛋白基因COL6A2的克隆及在毕赤酵母中的分泌表达
来源:食品科学网 阅读量: 103 发表时间: 2017-06-07
作者: 徐立群,王 皓,孙 旸,王 刚,陈 欢,陈 光
关键词: 胶原蛋白;pPIC9K;毕赤酵母
摘要:

用PCR方法以Ⅵ型胶原蛋白基因组DNA为模板,获得Ⅵ型胶原蛋白α2链基因,并将该基因插入到表达载体pPIC9K,对重组质粒pPIC9K-COL6A2所含的目的片段进行双向测序。将测序正确的重组质粒用限制性内切酶SalⅠ线性化,经电击转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中。通过MM/MD法进行甲醇利用表型的筛选,PCR鉴定目的基因的整合及G418梯度筛选高拷贝转化菌。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,目的蛋白分泌表达到胞外。1%甲醇诱导72h的发酵液,经SDS-PAGE电泳鉴定该重组蛋白分子质量约为32kD。

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