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—— 中国食品杂志社
为优化桑黄子实体多糖提取工艺，探讨其体外抗氧化活性及其对D-半乳糖（D-galactose，D-gal）诱导的小鼠胚胎成纤维3T3细胞损伤的保护作用，本实验采用水提醇沉法，通过单因素-正交试验优化提取工艺，并经琼脂糖凝胶层析柱纯化，通过噻唑蓝法及β-半乳糖苷酶（senescence-associated-β-galactose，SA-β-gal）染色法观察桑黄子实体多糖对D-gal诱导的3T3细胞损伤模型的作用，测定桑黄子实体多糖对细胞上清液中活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平、丙二醛（malondialdehyde，MDA）浓度、过氧化氢酶（catalase，CAT）活力的影响。逆转录聚合酶链式反应法检测桑黄多糖对衰老细胞中转录因子E2相关因子2（transcription factor E2-related factor 2，Nrf2）-抗氧化反应元件（antioxidant response elements，ARE）信号通路中相关基因mRNA表达水平。结果表明：提取温度80 ℃、提取时间3 h、料液比1∶40（m/V）、提取次数4 次，平均多糖提取率为6.64%；纯化处理后多糖质量分数为76.28%；桑黄子实体多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率为77.14%，对超氧阴离子自由基清除率为31.22%，对羟自由基清除率为56.86%，具有抗氧化活性；噻唑蓝法结果显示，与模型组相比，桑黄子实体多糖质量浓度达到100 μg/mL时细胞存活率极显著增加（P＜0.01）；SA-β-gal染色法结果显示桑黄子实体多糖可显著提高模型组细胞存活率（P＜0.05），对D-gal诱导的3T3细胞细损伤具有保护作用；与模型组相比，桑黄子实体多糖组显著降低3T3细胞外液中ROS水平（P＜0.05）、极显著降低MDA浓度（P＜0.01）、显著提高CAT活力（P＜0.05）；与模型组相比，桑黄子实体多糖组中Nrf2通路及其3 个下游基因（GCLC、NQO1和GCLM）的mRNA表达显著升高（P＜0.05）。结论：桑黄子实体多糖提取方法稳定可靠，获得的桑黄子实体多糖具有一定的抗氧化活性，能提高细胞的增殖活性，对D-gal诱导的3T3细胞细损伤具有保护作用，桑黄子实体多糖的抗氧化机制可能由Nrf2通路介导，提高GCLC、NQO1、GCLM的mRNA表达而实现。
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