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N81位点突变调控Ligilactobacillus cholophilus BD7642胆盐水解酶g1294特异性
来源：导入 阅读量: 4 发表时间: 2025-06-10
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作者: 任全路
关键词: Ligilactobacillus cholophilus；胆盐水解酶；特异性；异源表达；饱和突变
摘要:

以Ligilactobacillus cholophilus BD7642来源的胆盐水解酶（bile salt hydrolase，BSH）g1294为研究对象，重点探讨其活性位点突变对酶特异性的影响。首先，通过甘氨酸扫描技术对BSH g1294活性中心进行系统性突变，并采用平板点样法评估突变体酶活性；利用高效液相色谱分析突变体对6 种胆盐的水解特异性。针对关键位点N81位点进行饱和突变，结合分子模拟对接分析突变体与野生酶的差异。结果表明，与野生酶相比，部分位点突变导致酶活性消失，N81G和N174G突变体特异性增加，其中N81G水解特异性更优。N81位点饱和突变中的多个突变体酶活性变化明显，且水解能力各异。分子模拟对接表明，N81G突变体可通过减少催化位点Cys2与甘氨胆酸之间的空间位阻获得水解能力。综上，N81G突变体具有优于野生酶的特异性，且BSH对胆酸的分子识别机制可能并非简单的氨基酸识别，这可为理性设计BSH g1294酶工程改造提供新思路。

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