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—— 中国食品杂志社
在大肠杆菌BL21（DE3）中构建磷酸化-去磷酸化将D-葡萄糖转化为D-阿洛酮糖的途径。通过CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除竞争途径的相关基因，探究不同来源阿洛酮糖-6-磷酸磷酸酶（allulose-6-phosphate phosphatase，A6PP）对D-阿洛酮糖合成的影响，调控合成途径基因的转录水平，并进行工程菌发酵条件优化。结果表明，敲除磷酸果糖激酶A基因pfkA、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因zwf、阿洛糖-6-磷酸异构酶基因rpiB和甘露糖-6-磷酸异构酶基因manA后D-阿洛酮糖产量提升至0.95 g/L。布氏拟杆菌（Bacteroides bouchesdurhonensis）来源的A6PP（BbA6PP）合成D-阿洛酮糖的效果最好，D-阿洛酮糖的摇瓶产量提升至1.21 g/L。通过质粒拷贝数优化方式调节通路基因的表达水平得到重组菌BE-14的D-阿洛酮糖摇瓶产量最高，为2.06 g/L。经发酵条件优化后，重组菌BE-14合成D-阿洛酮糖摇瓶产量提高到2.72 g/L，在5 L发酵罐中分批补料发酵46 h的D-阿洛酮糖产量达到最高，为18.4 g/L。发酵液中仅存在微量的葡萄糖（0.7 g/L）及果糖（0.1 g/L），有利于后续分离纯化。本研究为大肠杆菌生物合成法高效生产D-阿洛酮糖提供了研究基础，对推动D-阿洛酮糖的工业化生产具有重要意义。
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