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—— 中国食品杂志社
目的：探究红米稻过氧化物还原酶OsPrx3基因原核细胞表达产物体外抑制DNA氧化损伤的功能。方法：分子重组构建大红谷OsPrx3基因及其定点突变体OsPrx3mC51A的原核表达载体，转化至大肠杆菌表达目的蛋白，体外鉴定其羟自由基清除活性；采用超螺旋形态（supercoiled form，SF）pMD18质粒为底物进行DNA缺刻实验，鉴定OsPrx3抑制DNA氧化损伤的功能。结果：成功在大肠杆菌细胞中表达红米稻OsPrx3；当OsPrx3质量浓度1.0 mg/mL、反应2 h时对羟自由基清除率为40%；构建目的基因OsPrx3定点突变体，通过测定羟自由基清除率发现OsPrx3mC51A近100%失活，证实第51位半胱氨酸残基是该酶参与过氧化反应的关键位点；以0.06 μg/μL pMD18质粒进行DNA缺刻实验，结果显示OsPrx3在相对较低质量浓度范围内（0.06～0.18 μg/μL）对目标DNA氧化损伤的抑制效应具有明显的量效关系，此范围内0.18 μg/μL OsPrx3的氧化损伤抑制率最高（88.9%），为最小酶质量浓度作用效应的1.7 倍；OsPrx3的最适反应质量浓度为0.15 μg/μL，此条件下抑制质粒DNA氧化损伤的效率为77.5%；若设定SF-DNA/缺刻形态DNA比值达1.0为氧化还原平衡点，则最适质量浓度作用下OsPrx3的较高抑制效应至少可维持180 min，并且此时体系中2 种DNA比值仍达1.5。以上结果表明，红米稻过氧化物还原酶OsPrx3原核表达产物体外具有较强抑制DNA氧化损伤的功能，本研究可为发现和运用红米稻有益蛋白资源提供理论依据。
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