基于脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的J774A.1巨噬细胞炎症模型,探究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)的抗炎作用。将J774A.1细胞分为正常对照组、LPS组以及LPS+LUFE低和高剂量组(LPS+LUFE-L组、LPS+LUFE-H组)。LPS+LUFE-L组和LPS+LUFE-H组细胞先以10、20 μg/mL的LUFE培养24 h后,除正常对照组以外的其余各组均以1 μg/mL的LPS处理24 h。酶联免疫吸附法检测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)以及细胞培养上清液的单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)水平;细胞迁移实验观察细胞趋化能力;细胞与细胞外基质实验检测细胞黏附功能;中性红吞噬实验检测细胞吞噬能力;免疫荧光染色观察细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;比色法检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、过氧化氢酶(catalase,CAT)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。蛋白免疫印迹方法测定Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)及核因子相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor,Nrf2)通路相关蛋白的表达情况。结果表明,LUFE干预后能够降低IL-6、IL-1β、MCP-1、ROS、MDA水平,抑制LPS所致巨噬细胞的趋化、黏附及吞噬功能的提高,增强细胞SOD、CAT活性。同时,下调TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)、Kelch样ECH关联蛋白1及核因子κB蛋白表达及活化水平;上调Nrf2、血红素加氧酶1、NADPH醌氧化还原酶1水平。综上,LUFE可通过调控Nrf2及TLR4/MyD88信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应。
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