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—— 中国食品杂志社
目的：探究苦荞来源类外泌体纳米囊泡（tartary buckwheat-derived exosome-like nanovesicles，TELN）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应及极化的调控作用与机制。方法：首先采用尺寸排阻色谱（size exclusion chromatography，SEC）法从苦荞中提取TELN，并进行表征与鉴定；然后以巨噬细胞RAW264.7为研究模型，通过转录组学分析LPS处理组与LPS＋TELN共处理组中巨噬细胞RAW264.7的基因表达差异；通过酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法检测关键炎症因子白细胞介素（interleukin，IL）-6、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、IL-1β、IL-10分泌水平；利用实时定量荧光聚合酶链式反应（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）检测炎症因子mRNA表达水平；同时采用流式细胞术和Western blot分析TELN对LPS刺激下巨噬细胞RAW264.7极化的影响，初步探究TELN在调控炎症中的作用和机制。结果：采用SEC法提取的TELN粒径分布均匀，其平均粒径为145.8 nm，浓度为（1.305±0.074）×1010 particles/mL；转录组分析结果显示，TELN作用下巨噬细胞衍生趋化因子、泛素化、磷酸化蛋白等显著上调，同时S100A8等调节免疫和炎症的基因表达水平也明显增加。ELISA结果显示，TELN处理组细胞上清液中促炎因子IL-6、TNF-α和IL-1β水平分别下降（75.6±0.9）%（P＜0.000 1）、（10.9±0.2）%（P＜0.000 1）和（57.8±6.8）%（P＜0.000 1），同时抗炎因子IL-10水平上升（69.7±4.6）%（P＜0.000 1）；qPCR结果在转录水平证实TELN显著下调IL-6、TNF-α和IL-1β mRNA表达，上调IL-10 mRNA表达。流式细胞术与Western blot分析结果一致表明，TELN能够显著抑制LPS诱导的M1型极化标志物CD86的表达，但未检测到CD206蛋白表达，提示TELN未促进M2型极化。结论：TELN通过双向调控炎症因子分泌（有效抑制促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β释放，显著提升抗炎因子IL-10水平）和抑制巨噬细胞向M1型极化，从而发挥抗炎作用。其对IL-6表达的抑制效果尤为突出，提示其作用可能与靶向核因子κB等信号通路有关。本研究可为深入解析苦荞的营养与免疫调节机制提供新视角。
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