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—— 中国食品杂志社
为实现食品中副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）和四环素耐药基因的同时快速检测，本研究整合重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification，RPA）和侧流层析试纸条（lateral flow dipstick，LFD）的技术优势，建立了一种双重RPA-LFD可视化检测方法。以种特异性基因vps2310和四环素耐药基因tetA为靶标分子，设计并合成多组引物探针。通过特异性分析、灵敏度分析、人工污染实验等对该方法进行全面评估。结果表明，经多轮筛选获得的引物探针组合可同时检测双靶标，与非目标菌无交叉反应性，具有良好的特异性。RPA反应最佳温度为40 ℃，vps2310/tetA最佳引物比为2∶1，最佳RPA反应时间为25 min，最低可检出2.04×102 CFU/mL的纯培养物。应用该方法对人工污染样品进行检测，经2 h短时前增菌后，检出限为2.60×102 CFU/mL。本方法具有操作步骤简单、设备要求低的优点，填补了目前副溶血性弧菌和耐药基因同时检测技术的空缺，可在30 min内完成检测，有助于早期识别潜在的高风险耐药菌。
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