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—— 中国食品杂志社
采用同源克隆、反转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）、融合引物嵌套PCR（fusion primer and nested integrated PCR，FPNI-PCR）与3’-cDNA末端快速扩增（rapid amplificationof cDNA end，RACE）技术相结合，从油橄榄（Olea europaea）中克隆得到苯丙氨酸解氨酶（phenylalanineammonia lyase，PAL）基因全长，命名为OePAL。序列分析表明，OePAL的DNA全长2 970 bp（GenBank登录号KJ511867），含一个内含子（393～1 220 bp）；全长cDNA有2 142 bp（GenBank登录号KJ511868），开放阅读框编码713 个氨基酸，与其他植物有较高的同源性。利用该基因构建重组质粒pPICZα A-OePAL，且在毕赤酵母X33中进行诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）检测显示该重组酶的分子质量在77.5 kD左右，纯化后的酶比活力为196.3 U/mg。酶学性质研究表明：该重组酶的最适反应条件为40 ℃，pH 8.8；在供试范围内Cu2+与Na+可以提高该酶活性；以L-苯丙氨酸为底物，在最适条件下该酶的Km为4.89×10－4 mol/L。结果表明成功地克隆到OePAL，构建了表达载体，并进行了功能验证。
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