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重组融合蛋白MBP-BSH在大肠杆菌中的表达及其纯化、功能鉴定
来源:食品科学网 阅读量: 124 发表时间: 2017-06-07
作者: 黄 茜,黄 璐,潘道东,杨 瑶,*
关键词: 融合蛋白MBP-BSH|表达纯化|功能鉴定|胆盐水解酶
摘要:

选择IF2融合标签,另选择含SUMO、GST、NusA和MBP融合标签的质粒构建表达载体。SDS-PAGE电泳结果显示,重组菌Escherichia Rosetta(DE3) (pLS932-BSH)的诱导表达细胞提取液上清出现了明显的融合蛋白MBP-BSH条带,经诱导表达条件优化后,MBP-BSH可溶性大幅度提高。用Ni-NTA Resin和Amylose Resin分别进行目标蛋白纯化,结果显示前者效果更好,并且C端融合His-Tag更有利于其与Ni离子结合,MBP-BSH蛋白纯化量更大,杂带更少。茚三酮显色反应测定酶活力,结果显示纯化后的MBP-BSH的酶比活力为2.4282U/mg。

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