领学术科研之先,创食品科技之新
—— 中国食品杂志社
期刊集群
单核细胞增多性李斯特菌iap 基因的克隆、表达与p60 蛋白的纯化
来源:食品科学网 阅读量: 90 发表时间: 2017-06-07
作者: 吕 添,武海涛,曹正茂,王小红*
关键词: 单核细胞增多性李斯特菌|iap基因|克隆表达|p60蛋白|纯化
摘要:

以单增李斯特菌基因组DNA 为模板,利用自行设计的引物,通过PCR 法扩增出单增李斯特菌的iap 基因。在iap 基因的5 '端和3 '端分别引入EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ 2 个酶切位点将其克隆到pMD-18T 载体上,构建克隆载体pMD-18T-iap。经测序正确后,将iap 基因克隆至表达载体pET-28a 上构建表达质粒pET-28a-iap。在IPTG 诱导下,携带pET-28a-iap 的E.coli BL21(DE3)高效表达分子质量约为60kD 的可溶性蛋白及包涵体形式的蛋白,其中可溶性蛋白占总p60 蛋白含量的76.3% 左右。诱导表达的可溶性蛋白通过Ni2+ 亲和层析柱纯化得到纯度在95.6% 以上的重组p60 蛋白,其提取率为68.3% 左右。

电话: 010-87293157 地址: 北京市丰台区洋桥70号

版权所有 @ 2023 中国食品杂志社 京公网安备11010602060050号 京ICP备14033398号-2