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—— 中国食品杂志社
目的：优化重组蛋白LuxS诱导表达及纯化条件，提高具有生物活性的重组蛋白LuxS的表达量，为体外合成自诱导物2（autoinducer-2，AI-2）奠定基础。方法：采用单因素试验，优化诱导培养基、诱导温度、诱导前菌体生物量、诱导时间以及异丙基硫代半乳糖苷（isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG）的浓度；采用Ni-NTAPurification System对重组蛋白进行纯化，比较Native Elution Buffer的咪唑浓度和pH值对重组蛋白纯化的影响，确定最佳的Native Elution Buffer；对比蛋白与树脂结合时不同缓冲液的纯化效果，选择最优的结合缓冲液。结果：重组蛋白的最佳诱导表达条件为：以LB培养基为诱导培养基，菌液OD600 nm为0.6～0.8，IPTG浓度为0.1 mmol/L，诱导温度为37 ℃，诱导时间为12 h。采用添加3 mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液作为蛋白与树脂结合的缓冲液，含500 mmol/L咪唑的Native Elution Buffer（pH 6.5）作为蛋白洗脱液。使用分离获得的LuxS蛋白合成的AI-2生物活性约为阳性对照的6 倍。结论：本研究成功优化了重组蛋白LuxS的诱导表达及纯化条件，获得了具有生物活性的重组蛋白，并成功合成了AI-2。
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