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—— 中国食品杂志社
应用IEDB、DNAStar、DNAMAN和SnapGene等生物信息学工具对草莓轻型黄边病毒外壳蛋白的氨基酸残 基序列进行分析。选择一段抗原性较强的肽段（位于外壳蛋白27～38氨基酸残基处），依据大肠杆菌（Escherichia coli）的密码子偏好性化学合成了该肽段的DNA编码序列（AE）。AE片段克隆至E. coli表达载体pET32a（＋） 的EcoRⅠ和XhoⅠ位点，获得重组质粒pET32a（＋）-AE。含AE片段的开放阅读框长561 bp，编码了一个187氨 基酸残基的重组融合蛋白，理论分子质量为20.29 kD。重组质粒pET32a（＋）-AE分别在E. coli BL21（DE3）和 E. coli Rosetta中进行了诱导表达和条件优化。重组融合蛋白在E. coli Rosetta中的最佳表达条件为1.5 mmol/L异丙 基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG）、35 ℃诱导表达2 h，产率为13.22 mg/L；在 E. coli BL21（DE3）中的最佳表达条件是为0.5 mmol/L IPTG、30 ℃诱导表达2 h，产率为9.55 mg/L。重组融合蛋白 经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、质谱鉴定表明，其含有所预测的草莓轻型黄边病毒外壳蛋白抗原表 位肽段AE。AE重组融合蛋白经Ni2＋亲和色谱纯化、EK酶切、分子筛除去融合蛋白标签后，免疫产蛋鸡。从免疫鸡 所产鸡蛋中提取鸡卵黄免疫球蛋白（immunoglobulin of yolk，IgY），Dot-Blot检测抗体结合活性。结果表明，所提 取的IgY可特异性识别AE肽段和SMYEV外壳蛋白。这一结果表明所预测的AE肽段具有较好的免疫原性。
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