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—— 中国食品杂志社
针对编码副溶血弧菌的特异性基因和主要毒力基因tlh、tdh、ureR进行引物及探针设计，通过优化反应条件，建立基于Taqman探针快速检测副溶血弧菌毒力基因的三重实时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）方法。利用10 株副溶血弧菌和22 株非副溶血弧菌对设计的引物及探针进行特异性验证，结果表明设计的引物及探针具有很高的特异性；优化后的引物浓度分别为tdh 0.15 µmol/L、tlh 0.15 µmol/L、ureR 0.80 µmol/L，探针浓度分别为HEX 0.50 µmol/L、FAM 0.50 µmol/L；该方法即使在高浓度的背景细菌存在下，DNA浓度与Ct值均呈良好的线性关系，检出限为1.8×102 拷贝/mL；以完整菌细胞的悬液为模板时，预变性时间为30 min，扩增检测效果与以基因组DNA（gDNA）为模板相当（ΔCt＜1）。本研究建立的三重real-time PCR方法能实现快速定量检测副溶血弧菌，并能有效区分致病性及非致病性副溶血弧菌，为副溶血弧菌的快速定量检测和风险评估提供快速、灵敏、准确的方法。
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