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—— 中国食品杂志社
应用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）建立基于颜色判定的快速、灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法。根据金黄色葡萄球菌特异性靶基因SAR0395设计LAMP引物，建立可视化LAMP检测方法。优化的反应体系为：1.6 µmol/L内引物（FIP和BIP），0.2 µmol/L外引物（F3和B3），4.0 mmol/L MgSO4，1.0 mmol/L dNTPs，0.4 U/µL Bst 2.0 WarmStart™ DNA聚合酶，120 µmol/L羟基萘酚蓝，扩增温度60 ℃，扩增时间60 min。在可视化LAMP体系中添加两条环引物（LF和LB）反应时间可缩短至20 min。该可视化LAMP反应60 min，其基因组灵敏度可以达到0.010 3 fg/μL，菌落灵敏度可以达到1.9 CFU/mL；利用46 株金黄色葡萄球菌和24 株非金黄色葡萄球菌证实该可视化LAMP具有良好的特异性和可靠性。本研究中建立的可视化LAMP可为金黄色葡萄球菌的快速检测提供一种新的技术。
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