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—— 中国食品杂志社
为实现硫酸软骨素酶AC(chondroitinase AC，ChonAC)在大肠杆菌中高效表达，通过PCR方法从肝素黄杆菌(Pedobacter heparinus)中扩增得到ChonAC基因cslA，采用融合蛋白技术构建麦芽糖结合蛋白(maltose-bindingprotein，MBP)与ChonAC的融合表达载体(MBP-ChonAC)，并在低温(15℃)条件下实现MBP-ChonAC的可溶活性表达，通过MBPTrap HP可实现一步纯化，使纯度可达95%以上，酶比活力可达94.1IU/mg融合蛋白(即相当于143.8IU/mgChonAC蛋白当量)。对MBP-ChonAC的酶学研究发现，其最佳催化pH值为7.5～8.0，最佳Ca2+浓度为20mmol/L，最适NaCl浓度为50mmol/L，最佳作用温度为20～35℃。MBP-ChonAC具有较好的热稳定性，在30℃时其半衰期可达8.3h。同时对其以硫酸软骨素A为底物的动力学常数测定发现，MBP-ChonAC相比ChonAC其Km稍有增大而催化常数kcat稍有降低，但是差别不大，表明MBP的融合没有对ChonAC的催化能力造成影响。通过宿主优化、诱导浓度优化及培养基优化进一步提高了MBP-ChonAC的表达量，其摇瓶培养酶活力就可达10800.5IU/L。
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