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—— 中国食品杂志社
目的：分析假交替单胞菌（Pseudoalteromonas tetraodonis）来源κ-卡拉胶酶的结构域，构建结构域截短突变体，探究非催化结构域对假交替单胞菌κ-卡拉胶酶的酶学性质与结构的影响。方法：利用大肠杆菌异源表达假交替单胞菌κ-卡拉胶酶WT和仅包含糖苷水解酶催化结构域的κ-卡拉胶酶截短体GH（缺失免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）样结构域），利用3,5-二硝基水杨酸法研究κ-卡拉胶酶WT和GH的酶学性质，利用分子对接和分子动力学模拟研究酶微观结构的变化。结果：成功对假交替单胞菌κ-卡拉胶酶WT及其截短体GH进行体外表达，WT和GH的分子质量分别为44.0 kDa和35.0 kDa，均能专一性地酶解κ-卡拉胶底物。酶学性质研究发现，假交替单胞菌κ-卡拉胶酶的Ig样结构域不影响酶的底物特异性、最适反应温度、最适反应pH值和κ-卡拉胶酶解产物的组成，但降低了酶的热稳定性、强酸（pH 4.0）和强碱（pH 11.0）稳定性、酶对底物的亲和力。酶的分子对接及分子动力学模拟分析结果表明，Ig样结构域截短后，κ-卡拉胶酶与κ-卡拉胶四糖底物的相互作用增强，酶结构的刚性增强，κ-卡拉胶酶F1、F3和F5指状区环状结构柔性降低，F2和F6指状区β片层结构柔性升高，这些结构的改变可能是截短体GH催化活性和热稳定性提高的原因。结论：本研究解析了假交替单胞菌κ-卡拉胶酶的非催化Ig样结构域与酶性质的构效关系，可为该酶结构与功能研究及酶的应用提供理论基础。
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