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—— 中国食品杂志社
目的：构建抗克伦特罗单链抗体(scFv)基因cbl，进行蛋白质结构模拟并对其理化特性进行分析。方法：采用重叠延伸PCR 方法，以能特异性分泌抗克伦特罗mAb 的杂交瘤细胞株5D1 为原料，构建抗克伦特罗scFv 基因cbl，进行测序，采用生物信息软件对氨基酸序列推导并进行结构预测，同时对理化性质进行分析。结果：抗克伦特罗scFv 基因cbl 全长720bp，对应225 个氨基酸，单链抗体分子量约为25826.6，等电点预测值8.78，为碱性蛋白质；二级结构显示抗克伦特罗单链抗体含α螺旋20 处，β折叠99 处，β转角28 处，随机卷曲93 处。cbl 三级结构建模显示重链(VH)和轻链(VL)形成一个疏水的" 口袋"，Linker 游离于此结构之外，符合scFv 的结构特点，明显具有抗原结合位点的空间构象，理论上应该具有良好的抗原结合活性。结论：构建一个抗克伦特罗scFv 基因cbl，应用信息学技术所获得的预测和分析结果为抗克伦特罗单链抗体的进一步表达、纯化和活性研究提供信息。
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