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鸭骨骼肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及其特性
来源:食品科学网 阅读量: 144 发表时间: 2020-04-01
作者: 刘静静,张 静,孙劲冲,吴 萌,杜顺丰,李春生
关键词: 鸭骨骼肌肌钙蛋白I;单克隆抗体;肉类来源;免疫学鉴别;特异性
摘要:

提取鸭骨骼肌肌钙蛋白I(skeletal muscle troponin I,sTnI)用于制备单克隆抗体,并对抗体性能进行 评价。将鸭骨骼肌提取后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)测定,取凝胶条带免疫小鼠,融合后经筛选获得分泌抗鸭sTnI的杂交瘤细胞株,用 酶联免疫吸附测定法检测抗体效价、亚型及特异性等特性。结果表明:鸭骨骼肌提取物经SDS-PAGE后出现2 条 颜色较深的条带,取分子质量24 kDa条带用于免疫;筛选后获得2 株单克隆抗体,其中3E7特异性较好,效价在 1∶1.0×105以上,为IgG1亚型,亲和常数(Ka)为5.9×105 L/mol;免疫印迹结果显示,抗体3E7能与鸭骨骼肌提取 物反应,与牛、羊、鸡、鱼骨骼肌提取物无明显反应。

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